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HPVE7与子宫颈上皮内瘤样病变细胞DNA损伤应答的相关性研究摘要: 目的 通过原代培养HPV阳性的宫颈上皮内瘤变Ⅲ度(CIN III)的成纤维细胞与HPV阴性的小儿包皮成纤维细胞,探索HPV E7在DNA损伤应答过程中的作用。方法选取临床病理确认为HPV16阳性的CIN IIII新鲜宫颈组织和HPV16阴性的小儿包皮组织,组织块经胶原酶A消化后培养,用慢病毒E7或pLV感染HPV16-成纤维细胞,用离子射线(X光,2 Gy或5 Gy)分别照射HPV16阴性与HPV16阳性细胞以及经pLV或E7慢病毒感染的细胞0~8 h,诱导细胞DNA双链断裂,采用间接免疫荧光法检测DNA双链断裂应答相关蛋白53BPl,BRCA1,NBS1,RPA32的应答特征。结果 成功从宫颈上皮内瘤变组织及小儿包皮组织原代培养出HPV16阳性及HPV16阴性的成纤维细胞。间接免疫荧光染色发现X光照射后,HPV16阳性细胞中53BP1,BRCA1,NBS1 ,RPA32 灶点多于HPV16阴性细胞(P<0.05) , E7感染细胞中53BP1,RPA32,NBS1灶点少于pLV感染细胞(P<0.05),均为6 h(2 Gy)或4 h(5 Gy)达峰。结论 利用原代培养CIN 成纤维细胞成功建立了研究DNA损伤中F7作用的模型,在宫颈癌前病变发展过程中,HPV E7能够抑制DNA双链断裂修复应答反应。 关键词: E7 原代细胞培养 DNA损伤 详情请点击下载PDF文件。 |
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